Изучение действия препарата натриевой соли никотиноил гамма-аминомасляной кислоты и витаминов группы В на некоторые биохимические и физиологические процессы в организме экспериментальных животных

УДК 615.214.31.03:616-008.93-092.9

Л .М . Карпов , В .Г .Савчук , А .В .Запорожченко , Т .В . Бахтогареева , О .В . Сторчило , Л .А . Медаковская

Одесский госуниверситет им. И.И.Мечникова

 

Потенциальные возможности и свойства пикамилона в достаточной мере еще не выяснены. Основной задачей проведенного нами исследования явилось изучение возможности применения препарата пикамилон для инъекций, в том числе в сочетании с витаминами группы В. В экспериментах на животных (мыши, крысы) оценивали его действие на скорость окисления пирувата (далее активность пируватдегидрогеназы - ПДГ), влияние на обмен никотиновой кислоты (НК), проницаемость плацентар­ного барьера для меченой липоевой кислоты ( 35 s-ЛК), всасывание глюкозы в тонком кишечнике,.

Материалы и методы

Работу выполняли на мышах F 1 (СВА х В1 аск) и крысах Вистар (в том числе беременных самках). Использовали пикамилон производст­ва НПО "Витамины" (г. Москва) и 35S - ЛК, которую синтезировали на кафедре биохимии Одесского госуниверситета на основе метода, разра­ботанного в НПО "Витамины", В некоторых исследованиях свойства пика­милона сравнивали с кавинтоном (ВНР), обладающим сходными показани­ями к применению.

В первой части работы мышам вводили внутримышечно следующие препараты (мг/кг): никотинамид - 10, ГАМК - 6,8, тиамин (B 1) - 12, пиридоксин (B 6) - 10, а также пикамилон - 18,3 и кавинтон - 18,3. Таким образом, никотинамид, ГАМК и пикамилон вводили в эквимолярннх дозах, а кавинтон - в равной с пикамилоном. Изучали действие этих препаратов и сочетаний пикамилона с витаминами B 1 и В 6 на активность ПДГ в гомогенатах органов мышей феррицианидным методом /1/ и в митохондриях из их печени по восстановлению НАД /2/ через 3 ч после инъекции.

Во второй части исследований мышам внутримышечно вводили НК, ГАМК и никотиноил-ГАМК (НК-ГАМК) в эквимолярных дозах (по 60 мкмоль/кг) и через I, 2 и 4 ч определяли в их органах содержав окисленных и восстановленных никотинамидных коферментов по Юденфренду /3/. Представлены только результаты, полученные через 4ч, так как в этот срок содержание коферментов было наибольшим.

В третьей части работы небеременным и беременным (3 нед беременности) крысам вводили 35S - ЛК (2 мг/кг) или ее же в сочетании с пикамилоном в той же дозе, что и ранее. Через 30 мин в печени, почках и мозге всех крыс, а также в плаценте и в печени крысят опреде­ляли содержание метки и активность ПДГ по методу Кисслинга и Лунд-квиста /1/.

В четвертой части исследований изучали влияние пикамилона (та же доза) на всасывание глюкозы в тонком кишечнике крыс в хронических опытах. При этом использовали крыс Вистар (самцы массой 180 -200 г), у которых в результате специальной операции /4/ можно было проводить полостную перфузию через фистулы двух участков тонкой кишки: изолированного, исключенного из пищеварительного канала, и функ­ционирующего, участвующего в пищеварении.

Результаты и их обсуждение

Изучение влияния внутримышечных инъекций пикамилона и кавинтона на скорость окисления пирувата в органах мышей показало, что они обладают примерно одинаковой и слабо выраженной способностью увели­чивать ее по сравнению с контрольной группой животных (табл. 1): ГАМК, никотинамид и особенно B 1 были значительно более эффективными (в 1,5 - 2 раза, а в мозге еще выше); в печени достоверных различий в действии этих препаратов не обнаружено, хотя в митохондриях они выявляются очень отчетливо. Сочетание пикамилона с витамином B 1 значительно повышает его действие на активность ПДГ: в большинстве органов, кроме мозга, она была выше, чем после введения одного B 1. Добавление к этой комбинации еще и B 6 практически не повлияло на результат.

Полученные данные позволяют сделать заключение, что в течение 3 ч (после инъекции) заметного распада пикамилона на НК и ГАМК не происходит. Сочетание пикамилона с витаминами B 1 и B 6 может усилить его специфическое действие и расширить спектр применения препарата.

В другой части работы было установлено, что через 4 ч после инъекции никотиноил-ГАМК не уступал НК по способности увели­чивать в органах мышей содержание никотинамидных коферментов (табл. 2). Правда, при этом прирост их восстановленных форм был в 1,5 -2 раза выше, чем окисленных. ГАМК же практически не изменял содержание коферментов в исследованные сроки (1 - 4 ч). Эти результаты нашему мнению, свидетельствуют о том, что НК-ГАМК вмешивается в процессы биосинтеза и распада никотинамидных коферментов. Однако для выяснений природа такого действия НК-ГАМК необходимы волнительные исследования.

 

Таблица 2

Содержание никотинамидных коферментов в органах мышей через 4 ч после инъекции никотината, ГАМК и никотиноил-ГАМК в дозе 60 мкмоль/кг,

(мкмоль/г свежей ткани) n = 7 – 20

Орган	Контроль	НК	ГАМК	НК-ГАМК
Мозг	Окисление (НАД + НАДФ)
	1,50 ± 0,10	2,44 ± 0,09*	1,52 ± 0,07	2,35 ± 0,01*
	Восстановление (НАД + НАДФН)
	0,92 ± 0,10	1,66 ± 0,08*	0,86 ± 0,07	1,65 ± 0,10*
Печень	Окисление (НАД + НАДФ)
	1,23 ± 0,08	1,8 ± 0,05*	1,19 ± 0,05	1,70 ± 0,05*
	Восстановление (НАД + НАДФН)
	1,50 ± 0,06	2,69 ± 0,09*	1,51 ± 0,10	2,60 ± 0,09*

*Различия по сравнению с контролем достоверны

 

Для изучения возможности влияния пикамилона на проницаемость плацентарного барьера к витаминным препаратам вводили совместно с ним самкам крыс, небеременным и беременным (3 нед беременности), 35 S – ЛК. Через 30 мин в органах животных, а у беременных также в плаценте и печени крысят, определяли содержание метки (в пересчете на липоевую кислоту) и активность ПДГ. Липоевую кислоту выбрали потому, что она обладает очень высокой способностью активировать ПДГ. Установлено, что пикамилон действительно способствует увеличению на­копления 35 S - ЛК в органах обеих групп животных, но у беременных эффект выше: прирост по сравнению с контролем достигает 20 – 30%. В печени плода действие пикамилона было таким же, но содержание

35 S - ЛК оказалось в 4- 4,5 раза ниже, чем в печени матери (табл. 3).

Закономерности, обнаруженные при изучении влияния 35 S - ЛК и пикамилона на активность ПДГ у этих же крыс, оказались в основном такими же, однако эффект был выражен более отчетливо (табл. 4). Активность ПДГ была намного выше у беременных крыс и в большей степени возрастала под влиянием пикамилона. Интересно, что она была примерно одинаковой в печени матери и плода. Полученные в этой части работы данные свидетельствуют о том, что пикамилон положительно влияет как на проницаемость плаценты к липоевой кислоте (а возможно и к другим веществам), так и на реализацию там ее функций.

В последней части исследований изучали влияние пикамилона на всасывание глюкозы из перфузата (25 мМ раствор) в двух участках тонкой кишки крыс: функционирующем и изолированном. Установлено, что данная доза пикамилона не изменяла в заметной степени скорость всасывания глюкозы и баланс воды.

Таблица 3

Влияние пикамилона (ПМ) на содержание 35 S – ЛК в органах небеременных и беременных крыс и в печени плода через 30 мин после инъекции (мкг/г ткани) n = 6-7

Крысы	Препарат	Печень	Почки	Мозг	Плацента	Печень плода
Небеременные	-	8,35±1,03	8,73±0,86	2,98±0,31	-	-
	+ПМ	9,66±0,81	9,85±0,77	2,93±0,14	-	-
Беременные	-	10,68±0,27	10,71±0,34	2,67±0,11	2,99±0,21	2,19±0,21
	+ПМ	12,88±0,51*	13,25±0,63*	3,51±0,17*	2,94±0,19	2,79±0,18

*Различия опытов с ПМ и без него достоверны.

Таблица 4

Влияние 35 S – ЛК и пикамилона (ПМ) на активность ПДГ в органах небеременных и беременных крыс и в печени плода через 40 мин после инъекции (мкмоль восстанов­ленного феррицианида/ г ткани) n= 6 - 7

 

Крысы	Препарат	Печень	Почки	Мозг	Плацента	Печень плода
Небеременные	-	3,04±0,21	2,63±0,12	1,32±0,06	-	-
	+ПМ	3,68±0,19	4,01±0,22*	2,56±0,17*	-	-
Беременные	-	6,32±0,43	7,54±0,44	4,01±0,21	7,78±0,39	8,51±0,57
	+ПМ	14,56±0,76*	20,38±1,19*	12,81±0,84*	11,79±0,73*	11,64±0,59*

*Различия опытов с ПМ и без него достоверны.

 

Полученные результаты позволяют сделать следующие выводы. Пикамилон практически не влияет на скорость окисления пирувата в органах животных, однако путем его сочетания с витаминами группы В ее можно значительно увеличить, что может существенно повлиять на Фармакологическую активность этого препарата. Пикамилон способен повышать проницаемость плаценты к липоевой кислоте и усиливать ее активирующее действие на ПДГ в органах крыс. Инъекции никотиноил-ГАМК заметно увеличивают содержание в тканях мышей никотинамидных коферментов, изменяя их соотношение в пользу восстановленных форм, по-видимому, и объясняет его (а также пикамилона) слабое дей­ствие на активность ПДГ.

Список литературы

1. Kiessling К ., Lundquist C.// Exp,Cell Res. - 1962. - Vol. 26. - N 1. - P. 189 - 197

2. Методы биохимических исследований Под ред. М.И.Прохоровой. - Л.: ЛГУ, 1982. - 272 с.

3. Юденфренд С. Флуоресцентный анализ в биологии и медицине. - М.: Мир, 1965. - 484 с.

4. Сторчило 0.В. Мембранный гидролиз, транспорт и их регуляция в функционирующем участке тонкой кишки крыс: Автореф. дис... канд. биол. наук. - Л., 1988. - 22 с.